可用Crispr kinome图书馆:汇集和单个质粒格式

客人的博客

这篇帖子由Guest Blogger提供贡献,成员加入咨询委员会并在广泛的研究所,约翰博士遗传扰动平台副主任。

一个基因筛选项目可能是一项巨大的事业,产生的结果只能用“大”来形容。但这样一个项目不应轻率地进行。无论以数组或集合格式执行,当然都有材料成本,而不管谁为它们买单。更重要的是,你的时间有机会成本;这是你生命中几个月的投资,最终可能只剩下一个Excel随机数字表格,让你伤心。

CRISPR激酶组库

了解有关CRISPL池库筛选的更多信息

为什么kinome?

在适当设计的扰动时 - 在使用CRISPR技术的屏幕, gRNAs到敲除基因-是必不可少的筛选成分,模型系统和试验对成功同样重要。有时,你可能会有一些阳性对照基因来测试你的生物模型的有效性和你实验的技术性能。但是,在许多以发现为导向的项目中,关键是这种表现型没有阳性对照——你已经开发了一个新的模型或一种新的化验方法,或两者都有,你不知道涉及到什么基因。或者你不知道你的化验结果如何。或者你没有足够的细胞来进行全基因组扰动。因此,虽然有些人可能会说,做某件事的唯一方法是做得很大,但有时更渐进的方法是审慎的。

CRISPR Kinome图书馆里有什么?

因此,我们很高兴提供针对人类科林斯。虽然基因组的任何子集通过定义受到限制,但是Kinome是一种良好的注释收集基因,其可以提供用于开发模型的有用起点和试验以测试该模型。这两个库都可从Addgene获得,作为两组中提供的池,每个池,每种激酶有4根GNA,因此屏幕可以用每种基因4或8 GRNA进行。此外,池有两个矢量格式可用:全能(Lenticrisprv2.,表达来自该单载体的CAS9和单独的GRNA)和仅指导(仅表达GRNA的LENTIGUIDE,用于已经具有CAS9的细胞)。每个图书馆由大约3,000个GRNA组成,而不是在基因组文库中发现的70,000或更多的GRNA,因此可以以更典型的组织培养规模以汇总形式筛选,同时仍提供真正的生物洞察力的可能性。

合并和单个质粒格式

第一个在Addgene的图书馆,您也可以订购个体Lentiguide grNA质粒针对人类牛仔群岛。这些质粒含有相同的3-4 GRNA,在汇集库的第一个子集中发现。当筛选表型(例如细胞 - 非自主效应)时,单个质粒将是有用的,这不会为在汇总设置中筛选。个体质粒也可用于成像或基因表达测定,其需要分别筛选个体质粒。此外,该集合可用于樱桃拣选单个GRNA,该GRNA可作为汇集屏幕中的命中,从而促进更快速的随访。

我们希望生物群体会发现这些试剂有用。幸福的筛选!


非常感谢我们的客人博主,John Dooh!

约翰Doiff.John Doifench是广泛的遗传扰动平台的副主任。他的妈妈总是告诉他,他拥有完全正常大小的最好的单词和手指。

引用:

1. Doifh,John G.等人。“优化的SGRNA设计,以最大化活动并最大限度地减少CRISPR-CAS9的偏离目标效果。”自然生物技术(2016)。PubMed.PMID: 26780180。pmed中央PMCID:PMC4744125

addgene博客上的资源伟德体育中心

addgene.org的资源

下载addgene的crisprup 101电子书!

话题:克里普尔克CRISPR合并的图书馆

发表评论

分享科学变得更容易了……订阅我们的博客

订阅