热质粒和病毒制剂 - 1月2021年1月

通过各种Addgenies

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每隔几个月,我们通过我们突出了存储库中的新质粒和病毒准备的子集热质粒物品。这些文章提供了近期质粒沉积物的简要摘要,我们希望他们能让您更容易地找到并使用所需的质粒。如果您想写下最近的质粒存款,请注册这里

这是你在这篇文章中找到的内容:

一种快速蓝光诱导CRE,用于精确控制细菌基因表达

经过梅根雷科

重组酶是识别,切割和改变DNA中的特异性靶序列的酶导致各种结果,包括切除或插入,反转,易位或盒式交换。通过利用重组酶来操纵基因组,科学家可以控制其感兴趣的基因的表达。虽然重组酶是其自己的强大基因表达工具,但它们的活动可以通过使用微调并精确控制Optimetics.。光学工具使用光诱导蛋白质的构象变化。

蓝光的示意图使VVD子单元一起用于功能性CRE重组酶。CRE重组酶促使LOXP位点允许促进下游RFP。
将用于重组酶活性的RFP报告酶活性的细胞暴露于蓝光。与其他重组酶/光电聚体对相比,CRE-VVD显示出显着提高的活性。使用biorender.com创建

在他们最近的ACS合成生物学出版物中,Mary Dunlop的实验室通过用鲜艳(VVD)光学体分离和连接蛋白质区域,产生光敏CRE,OPTO-CRE-VVD。在施加蓝光时,VVD将C末端和N末端CRE片段分解在一起并允许重组酶活性。Opto-CRE-VVD精确,对环境光的敏感性低,并且可以通过低强度蓝光激活它的多功能。与其他可以占用的Split-CRE系统不同24小时削减,Opto-CRE-VVD快速,可切成2小时。

在此获得Opto-CRE-VVD的重组酶实验!

床单,MB等,ACS合成BIOL。2020。https://pubs.acs.org/doi/10.1021/ acssynbio.9b00395

o'brian,sp,等,Biotechnol J. 2014。https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24390935/


超代理基因组编辑器CRISPR-CAS¶

经过梅琳娜粉丝

Doudna Lab将CrisPr-CAS工具箱添加到Crispr-Casɸ中,从巨大的噬码的Biggiephage Clade的超代理基因组编辑器。在本文中,他们调查了三个Casɸorthologs,Cas-1,Cas-2和Cas-3。

由于几个原因,该系统非常值得注意。Casɸ仅〜70kda,分子量大约一半的Cas9或Cas12a。这部分是由于它只有一个活动站点。与其他依赖多个活性位点的其他CAS酶不同,CAR中的RUVC活性位点可以进行CRRNA和执行CRRNA引导的DNA切割。此外,Casɸ具有最小的PAM要求。例如,对于Casɸ-2,Pam序列是5'-TBN-3'(其中B是G,T或C)。作者证明了Crisp-Casɸ是活跃的体外以及人和植物细胞。

CAS-PHI和竞争噬菌体将DNA注入细胞的示意图。CAS-PHI消除了竞争的噬菌体DNA。
来自Biggiephage的Casɸ可以消除竞争的流动遗传元素。由Basem Al-Shayeb在Doudna Lab的图像。

寻求更紧凑的基因组编辑的科学家因销售更广泛的有靶基因组序列的递送限制和科学家而受益于Crisp-Casɸ。

为您的实验获得CRISPR-CACPHI!

Pausch等人,科学2020,https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/32675376/


MGOLD,最具光稳定的黄色荧光蛋白到目前为止

经过Justin Ng.

高通量筛选方法,如荧光激活细胞分选(FACS),帮助研究人员筛选数以千计的细胞,以确定显示感兴趣的特性的细胞。然而,FACS不能在空间和时间上靶向单个细胞。现在,Francois St-Pierre的实验室开发了一种新的FAC系列细胞筛选,单细胞表型观察和用光(聚光灯)标记为一种与来自大型异质培养物的独特的时空表型分离单个细胞的方法。

荧光显微镜图像比较Mgold与Mvenus。Mvenus荧光从0小时淡化到3小时,而MGOLD荧光在3小时内仍然可见
HeLa细胞表达了角蛋白的融合,Mgold(顶部)和肌肉(底部)。每30秒成像细胞3小时。图片来自Lee等,2020年

聚光灯用于图像以超过300万细胞类型表达黄色荧光蛋白(YFP)的变体。该团队确定了一个新的YFP变体MGOLD。发现MGOLD更加光稳定的光稳定性和纯于Mvenus,父母YFP,并且是最具光稳定的YFP。因此,预计MGOLD将有助于需要高光稳定性的实验,例如时间延时成像或分子的高光功率检测。

在这里找到你的mgold荧光质粒!

Lee,J.等,科学推进2020。https://doi.org/10.1126/sciadv.abb7438


Crisprcler

经过云顶娱乐 韦德国际

以下是近期CRISPR质粒的一些亮点。要找到Addgene提供的所有CRISPR质粒,请访问我们的CRISPR质粒和资源页面

  • CDDR(基于crispr - cas9的双荧光DSB Repair)是一种用于哺乳动物细胞的双链断裂修复试验。它是基于在荧光报告物中引入和分辨两个dsb。
  • Yongsub Kim的实验室工程师编辑拓展了他们的PAM灵活性。
  • Kivanc Birsoy沉积了针对人体表观遗传基因的慢病毒Crispr淘汰图。
  • 与电流N末端连接的SACA9 ABE变体相比,新的SACA9 ABE变体(MicroaBei744)改善了目标编辑效率,并降低了RNA关靶占地面积。它也是最小的AAV可交付的ABE之一。
  • Jesse Zalatan的实验室沉积在酵母中的化学诱导型Crispra系统的质粒是通过募集MS2官能化GRNA的介导的。
  • 使用这种慢病毒CRISPR人类基因组宽的图书馆减少了CRISPR屏幕的规模。该库可提供2个随机配对的每个构造,并且与较大的基因组图书馆相比,屏幕中的缩小缩小而不会降低。

病毒图标来自病毒服务的新增功能

经过Jason Nasse.

我们经常从我们的质粒收集中添加新的病毒等分试样提供即用型病毒准备。以下是最近几个月的一些新病毒准备方法:

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