热质粒 - 10月2020年

由各种addgenies.

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这是你在这篇文章中找到的内容:

用弓式标记兴奋性和抑制突触蛋白

经过Jason Nasse.

自上锋之日起高尔基和卡哈尔随着每一种工具的出现,我们研究和理解人类大脑中860亿个神经元之间复杂的相互作用的能力不断增强。但是研究突触连接和生理学是特别具有挑战性的,因为它们数量巨大,通常很小,可以包含不同的神经递质。利用基因编码的荧光蛋白与通过mRNA显示生成的纤连蛋伟德2021足球欧洲杯买球平台白内体结合(FingRs),薛汉的实验室已经开发出AAV载体,可以选择性地可视化大脑中的兴奋性和抑制性突触。

绿色,红色,Cre-诱导和逆转录病毒指控变体使用AAV递送到小鼠中。它们可用于定义神经群体中的双色突触标记或突触标记。
图1:不同束缚构建体的示意图和实验结果。来自Bensussen等人的图像。,2020。

手臂构建体靶向突触脚手架蛋白PSD95和Gephyrin分别标记兴奋性和抑制突触。曾经在神经元中表达,牵引效果与内源突触蛋白结合,允许它们定位于突触并使来自细胞的其他区域最小化无关荧光。通过组合表达不同荧光蛋白的载体靶向抑制或兴奋性突触或克雷诱导,研究人员可以在没有抗体伟德2021足球欧洲杯买球平台标记的限制的情况下探索突触积分和连接。这打开了门体内试验,例如跟踪海马成人出生的颗粒细胞的突触成熟模式随时间未以前不能进行的。

在这里找到瞄准FingR质粒的突触!

Bensssen S等人,Iscience 2020。https://doi.org/10.1016/j.isci.2020.101330


Split-Wrmscarlet,荧光蛋伟德2021足球欧洲杯买球平台白系统Caenorhabditis elegans.

经过云顶娱乐 韦德国际

伟德2021足球欧洲杯买球平台荧光蛋白(FPs)传统上被引入Caenorhabditis elegans.在面料瘤中,阵列可以导致由于过表达引起的伪影。CRISPR可以将FP基因插入目标基因的本地基因座,但引入了大的遗传变化C。线虫使用CRISPR是很困难的,因为它需要效率低得多的双链模板,而不是效率更高的单链寡核苷酸供体(ssODN)。那么你如何使用CRISPR将大型FP基因引入C线虫吗?通过使用分裂FP方法。

Split-wrmscarlet是一个新的分体式红色FP,蠕虫在蠕虫中比分裂 - sfcherry3更亮。它是由Maria Ingaramo,Jerome Goudeau,Cynthia Kenyon.以及Calico生命科学公司的同事。像许多分裂的FPs, split- wrmscarlet是由两个FP片段组成,它们本身不荧光。当这两个片段结合在一起时,它们就会融合并发出荧光。团队设计C线虫表达wrmScarlet的细胞系1 - 10没有与任何其他细胞蛋白质无关。他们用SSODN模板使用CRISPR来介绍小WRMSCARLET11.其长度小于60nt以标记靶蛋白。该团队通过针对六种不同的基因验证了该工具,其蛋白质产品具有明显的本地化。

具有不同亚细胞位置的分裂Wrmscarlet标记蛋白的荧光显微镜图像
图2:具有不同亚细胞位置的分裂wrmscarlet标记蛋白。来自Goudeau等人的图像。,2020。

获取Split-WrmScarlet为您的实验!

Goudeau, J. bioRxiv, 2020。https://doi.org/10.1101/2020.07.02.185249


预测细胞周期长度与组蛋白融合荧光定时器

经过凯特Harten DeMaio

对细胞周期试图了解发展,再生和某些疾病状态的研究。但是,很难观察细胞周期体内,特别是如果细胞是迁移或深层组织。要解决这个问题,Shangqin郭和她在耶鲁大学的同事将一种变色荧光定时器(FT)蛋白融合到组蛋白H2B中,以便在活细胞中观察。荧光计时器在合成前后发出蓝光,几个小时后,构象变化导致蛋白质发出荧光红色。H2B-FT-red持续时间长,在原代小鼠胚胎成纤维细胞中有84小时的半衰期。这种融合蛋白可以通过检测蓝细胞和红细胞的比例来确定细胞周期长度。经历快速细胞周期的细胞蓝红比例较高,而周期较长或较慢的细胞红比蓝(伊斯曼等人。,2020年)。

屏幕截图2020-10-07在3.35.14点PM-min
图3:用H2B-FT病毒转导BAF3细胞,并以不同浓度的IL-3生长。高浓度IL-3生长的细胞显示出高比例的蓝色荧光,表明细胞增殖。在没有IL-3的培养基中维持的BAF3细胞仅显示红色荧光。来自Eastman等人的图像。,2020年。

研究人员测试了急性髓系白血病从胚胎发育到髓系增殖的几种情况,发现H2B-FT的表达一致地预测了这些不同细胞类型的细胞周期速度。在一个例子中,H2B-FT在依赖IL-3增殖的小鼠B细胞(BaF3)中表达。流式细胞术检测显示,低剂量IL-3培养的细胞增殖减少,红细胞增多。在高IL-3条件下生长的细胞以蓝色荧光为主,表明细胞周期快。IL-3被移除的细胞由于不能增殖而完全变成红色。

尝试用质粒来研究细胞周期!

伊士曼et al。细胞报告2020。https://doi.org/10.1016/j.celrep.2020.107804


Crisprcler

经过云顶娱乐 韦德国际

以下是近期Crispr质粒的一些亮点。找到从加法中获得的所有CRISPR质粒,前往我们的CRISPR质粒和资源页面

  • Casphi是70 kda cas蛋白专门鉴定在巨大的噬菌体基因组中。它在体外和人类和植物细胞中活跃。其小尺寸为蜂窝送货提供了优势。
  • SC ++是密码子优化的,工程化犬科犬Cas9核酸酶它有一个宽的5 ' -NNG-3 ' PAM。
  • 人糖基因CRISPR文库是一种新型慢病毒CRISPR文库靶向人糖基转移酶基因与细胞糖基化有关的其他蛋白质。
  • Casrx是A.RNA定位CAS系统可用于黑腹果蝇。
  • 用于多路复用编辑和筛选应用的CAS混合动力(Chyma)敲除文库在单个U6启动子下表达杂交CAS9-CAS12A GRNA。这Pararog和双靶向混合GRNA文库可用于识别同源基因之间的相互作用。这外显雷杂交GRNA图书馆删除人类替代盒式外显子并破坏替代外显子的基因。

来自病毒服务的新增功能

经过Jason Nasse.

我们定期从我们的质粒收集中添加新的病毒分株以提供现成的病毒预备。以下是最近几个月的一些新的病毒准备:

  • Dolcetto人类Crispr抑制池库除了池库格式之外,现在还可以作为慢病毒准备!文库抑制了超过18000个人类基因。
  • hsyn1-sio-stgtacr1-fusionred是一个crea依赖,体靶向抑制通道紫质。它现在是AAV5。
  • 红移钙传感器JRGECO1A现在是可用的AAV-PHPeb。

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