创新的蛋白表位标记

由玛丽传动装置

不同的蛋白质标签:MYC, HA和Inntag。蛋白质标签最早出现于20世纪80年代,现在是科学家工具箱里最有用的东西之一。我们已经讲过了质粒101,标签可以帮助您确定目标蛋白的定位,纯化它,或确定其表达水平,而不需要自定义抗体。需要注意的是,一个标签可能会干扰蛋白质的定位和/或功能,所以必须仔细测试每个被标记的蛋白质,以确保它保留了天然蛋白质的属性。由于这个过程需要大量的时间和精力,马蒂Aldea合作者们创造了一套“无害的标签”(inntags)不太可能改变蛋白质的特性。

为什么我们需要新的表位标记?

像FLAG、HA和Myc这样的短表位标签可以采用许多不同的构象,因此可能与它们所标记的蛋白质相互作用并改变它们。事实上,最近的一项研究在400种蛋白质中,发现有20%标记的蛋白质与未标记的蛋白质没有相似的定位。这些发现的动力Georgieva et al。开发具有明确三维结构的新标签,不太可能破坏蛋白质折叠和功能。通过生物信息学分析,他们还选择了其他关键特性,特别是高溶解度、对其他蛋白质的有限亲和力和对抗体的可及性。从他们最初的候选蛋白中,他们从非脊椎动物系统中选择了12个候选蛋白域。初步测试表明旅店标签IT5,IT6,IT10在细胞中表达良好,没有形成不良的聚集物。

使用芽殖酵母作为模型系统,Georgieva等人检查了影响GFP融合到intag或传统的FLAG、HA和Myc标记。令人印象深刻的是,与未标记的GFP过表达相比,IT6-GFP并没有减少酵母细胞的大小和活力,而其他融合物对这些参数有一些负面影响。IT5和IT6在免疫荧光和免疫沉淀两种应用中均表现出良好的结合效率,但传统标记均不适合这两种应用。

为了证明inntag确实是无害的,Georgieva等人创建了cyclin的标记版本Cdc28和伴侣Ydj1,两者都显示出与多种其他蛋白质复杂的相互作用。同样,IT5和IT6融合后,细胞形态几乎没有变化。相比之下,Flag和HA标签对细胞大小和生长速率有特别不利的影响,这表明它们损害了蛋白质之间的相互作用。

如果你正在寻找蛋白质的标签,inntags IT5和IT6是一个很好的开始。这些标记很容易在多个通用应用程序中使用。由于其对天然蛋白质结构的影响有限,inntag可能成为检测蛋白质相互作用的首选标签,特别是在单分子或高通量应用中。也许IT5和IT6甚至会取代我们以前的表位标签——只有时间才能证明!


参考文献

1.Georgieva, Maya V等人。内含标签:用于标记无害蛋白质的自结构表位。自然方法(2015)。PubMedPMID: 26322837

2.斯塔德勒,夏洛特等人。免疫荧光和荧光蛋白标记在哺乳动物细胞中的蛋白定位显示高度相关。自然方法10.4(2013): 315 - 323。PubmedPMID:23435261

资源Addgene

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