慢病毒载体的使用和概述

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玛丽传动


慢病毒的产生和感染细胞慢病毒载体伟德BV下载
是实验室中最受欢迎和最有用的病毒载体之一。伟德BV下载慢病毒的优点包括较大的遗传能力和转段分裂和非分裂细胞的能力。慢病毒载体伟德BV下载是许多CRISPR应用的选择的载体,它们也在临床基因治疗应用中取得了成功。继续阅读更多关于慢病毒向量的当前(和未来)应用的更多信息!伟德BV下载

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慢病毒矢量历史和组件

在嗅灯泡中成功的慢病毒感染在20世纪90年代早期,研究人员开发了基于逆转录病毒像moloney鼠白血病病毒(mmlv)。载体可以整合到基因组中,允许长期转基因表达,但它们只能感染积极分割细胞。另一种类型的载体,基于腺病毒,可以感染非分裂细胞,但没有持续的转基因表达。为了设计一个病毒载体系统可以做到这两点,Addgene存库迪迪埃Trono合作者们转向慢病毒HIV-1,众所周知会感染非分裂细胞。

第一慢病毒载体系统由三种质粒组成:包装,包膜和转移质粒。包装质粒携带突变的HIV-1潜水员,由于几件缺失的蛋白质而不能包装本身。包膜质粒含有病毒包络,以规定染色主义,或载体可能感染的细胞类型。最后,转移质粒编码了由HIV-1长端子重复(LTR)侧翼的所需转基因,其促进病毒包装和宿主基因组集成。在共转染这些质粒后,293T细胞将含有转基因的慢病毒颗粒释放到培养基中,可以收集用于实验使用。1996年,Naldini et al。转导大鼠神经元在活的有机体内用β-加仑和其他记者,他们表明表达持续了至少30天。虽然腺相关的病毒载体也可以靶向非分配细胞,但慢病毒载伟德BV下载体可以携带更多的遗传货物(8kb vs.4.5kb),并且它们仍然是靶向和追踪大脑中的细胞(图1)。

第二代慢病毒包装系统

下面的图形显示了慢病毒基因组的浓缩方式,以产生第2代慢病毒系统(图2)。确实仍然对病毒生产的艾滋病毒基因非常重要:Gag(结构前体蛋白),Pol(聚合酶),TAT(来自5'LTR的转录激活的病毒异椎动因子)和Rev(促进转录物的核导出)。通常来自VSV-G由于宽的感染性,通常来自VSV-G的不同病毒包膜蛋白(ENV)通常用作HIV-1 ENV的替代品,其只能感染CD4 +细胞。第二代慢病毒载体伟德BV下载

第三代慢病毒包装系统

第三代慢病毒载体的组分伟德BV下载虽然第二代系统比原始系统更安全,但是存在通过转移和包装质粒之间的重组产生复制绩效病毒的可能性。进一步减少这种可能性和增强生物安全性,无聊的等。创建了第三代系统(图3),其不同于2个关键方式。首先,将包装系统分成两种质粒:一个编码REV和一个编码GAG和POL,增加创建复制态病毒所需的重组事件的数量。其次,通过加入含有与独立于其独立的启动子的嵌合5'LTR消除TAT。尽管更安全,但由于更高的质粒数,该系统可能更麻烦并导致降低病毒滴度。有关第二代和第3代包装系统之间的关键差异的更多信息,请参阅我们的慢病毒质粒常见问题解答

实验室中的伟德BV下载慢病毒载体

慢病毒载体伟德BV下载在实验室中非常流行 - Trono实验室的慢病毒包装和信封质粒是Addgene最需要的两个质粒!带有VSV-G包膜的慢病毒颗粒在很多类型的细胞中都具有高传染性,所以它们是用于原代细胞或其他难以转染的细胞的理想工具。慢病毒条码库已经用于复杂的应用程序,如谱系追踪在异质肿瘤中。

慢病毒载体伟德BV下载也常用来制造稳定的转基因表达或敲除细胞系。许多CRISPR质粒是为慢病毒而设计的,包括Addgene在2015年最受欢迎的质粒:lentiCRISPR v2,用于有针对性的修改和基因组筛选

临床中的慢伟德BV下载病毒载体

由于慢病毒载体可以提供伟德BV下载大量的DNA(〜8 kB),免疫反应相对较低,因此应该对研究人员感兴趣地开发这些载体进行基因治疗的遗憾。2003年,VirXsys开始与慢病毒载体的第一个临床试验。来自HIV-1患者的CD4 + T细胞是用慢病毒载体转导含有针对HIV-1封套的反义序列。截至2013年,65名患者已被此治疗治疗,降低病毒载荷,并未引起严重的不良反应。在其他疾病的小型试验中观察到慢病毒载体的临床益处,包伟德BV下载括常见的造血障碍镰状细胞性贫血beta-thalassemia。慢病毒载体伟德BV下载是很有前途的制剂癌症免疫疗法,但本研究仍处于临床前/早期临床阶段。

研究人员还在努力使慢病毒载体更安全。伟德BV下载由于慢病毒载体整合到基伟德BV下载因组中,它们可以通过改变局部基因表达来促进肿瘤发生。Self-inactivating(罪)慢病毒载体伟德BV下载在3 ' LTR中有一个缺失,可以防止附近基因的异常激活。这些更安全的载体已经成为基因治疗的标准。研究人员还开发了整合酶缺陷的慢病毒载体伟德BV下载适用于需要大基因容量的慢病毒载体,但对瞬时转基因表达是足够的应用。

慢病毒载体技术自上世纪90年代以来在研究影响和安全性方面都取得了很大进展。许多Addgene最需要的质粒用于慢病毒表达系统。如果你是慢病毒世界的新成员,在开始你的实验之前,请检查我们的慢病毒质粒和生物安全指南。请在下面的评论区告诉我们你是如何使用慢病毒的!


参考

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