质粒101:可抑制促进剂

由玛丽传动装置

玛丽传动

启动子控制RNA聚合酶和转录因子的结合。自从启动子地区因此,驱动靶基因的转录,因此决定了基因表达的定时,并且在很大程度上限定了将产生的重组蛋白的量。与T7,CMV,EF1A和SV40等许多常见的启动子始终有效,因此称为组成型启动子。其他人只在特定情况下积极。在上一篇文章中,我们讨论过诱导启动子,可以从中切换离开对A.状态,以及如何在您的研究中使用这些。今天,我们会看看抑制促进者,可以从中切换对A.离开州,以及常用的可抑制二元系统果蝇

订阅质粒博客帖子! 抑制促进者如何受到监管?

与诱导型启动子一样,可通过阳性或阴性对照调节可抑制促进剂。

积极的可抑制:转录是上 -一个激活蛋白是束缚,转录正在进行中。当压缩机结合活化剂蛋白时,活化剂蛋白不能再结合启动子序列并转换转录离开

负抑制:转录是上 -一种阻遏蛋白不能使启动子序列和转录无阻碍地结合。一旦共压制蛋白结合阻遏蛋白,阻遏蛋白可以与操作者结合。然后绑定阻遏物可防止转录发生,这意味着现在转录离开

阳性可抑制和负可抑制启动子之间的比较

我们将查看自然和工程化可抑制促进者的例子。

化学抑制的启动子

截止

滴定系统是一种阳性可抑制启动子,从细菌TET操纵子设计出来。在本地系统中,四环素阻遏物(四)可以与四环素算子序列(Teto)结合,防止转录。在四环素(Tet)的存在下,Tet优先结合Tet并避开Teto元素,允许转录进行进行(以这种方式控制GFP表达PJKR-H-TETRE来自教会实验室)。

将该诱导系统转化为可抑制系统,Gossen和Bujard通过熔化十四型转录激活结构域VP16来创建四环素控制的反辐期异形器(TTA)。TTA与含有Teto元素的启动子结合(通常以七组作为TRE链接),允许转录进行。当补碳素或其衍生物中的一种衍生物时,它结合TTA,从启动子中除去并转录转录离开

四环素关闭系统原理图

尽管它们的细菌起源,TET系统在哺乳动物细胞中均匀,并且可以以上述可抑制方式使用TRE的启动子,以及我们之前帖子中详述的诱导方式。有关addgene tet质粒的更多信息,请参阅我们的四环素资源页面

ADH1

ADH1负可抑制启动子通常用于酵母。在培养的前24小时,当葡萄糖是丰富的并且乙醇浓度低时,PADH1显示低启动子活性(强酵母促进剂PTEF的〜20%活性)。作为乙醇累积,它与阻遏物结合,使其能够结合启动子并抑制PADH1活性。研究人员设计了对乙醇不太敏感的PADH1变体,包括“中间”ADH1启动子PADH1M,其在酵母培养的晚期乙醇消费阶段保持活性。

可抑制二元系统

GAL4 /无人机

二元体系允许对基因表达的精湛控制和对发育中基因表达的追踪。一个常见的二进制系统是GAL4 / UAS系统与酵母隔离。在该系统中,在恒定的旋转遗传研究中,UAS基础启动子表达低,但是通过GAL4与UA的结合激活。

如果将Gal4放在组织或发育阶段特异性启动子的下游,并且设计UAS记者构建体,则只有在促进者处于活跃的地方和/或何时表达报告者。通过这种方式,您可以询问无表特征激发商的活动。类似地,将US放置在转基因上游允许在还表达GAL4的细胞中指向该基因的表达。

GAL80阻遏物可以部分抑制与UA的GAL4结合,将可抑制元素添加到该二进制系统中。因此,可以在不同的启动子下放置GAL4和GAL80,并产生uas驱动基因表达的复杂模式。为了进一步提高系统的复杂性,研究人员使用了Split Gal4架构或将系统与FLP / FLT的系统组合在一起Del Valle Rodriguez等。

GAL4 UAS二进制系统

Lexa / Lexaop.

赖和李发达的lexa /lexaop.,一个互补的系统到Gal4 / UAS以基本上相同的方式。Lexa DNA结合域识别出lexaop.序列和GAL4或VP16激活域融合到LEXA DBD的融合导致GAL80可抑制和GAL80不敏感激活因子lexaop.。该系统通常与GAL4 / UA一起使用,以检查报告基因的表达,或将报告者表达与来自另一个转基因或siRNA表达的一个启动子组合。

Q系统

波特et al。来自Liqun Luo的实验室发展了Q系统从真菌中的基因簇神经孢子仓库。Quas启动子在基础状态下比UA稀释,并且诱导剂QF的共表达可以将Quas驱动的表达增加约3,300倍果蝇细胞。抑制器QS以及QF的共表达导致来自Quas的中间表达,如Gal4 / Gal80和UA所示。QF介导的抑制因加入奎酸而可逆果蝇细胞。工作魏等人。康申实验室的研究也表明了Q系统在C. Elegans.

随后的罗和波特实验室的工作已经改进了Q系统并介绍了第二代QF2激活因素。这些激活剂解决了广泛的QF表达诱导的恒生致死性的问题。riabinina等。还开发了嵌合反膜激动活性剂GALQF和LEXAQF,其激活它们各自的UA和lexaop序列,但也受到QS和醋酸的调节。


参考文献

Pfeiffer,Barret D.等人。“细化有针对性基因表达的工具果蝇。“遗传学186(2)(2010):735-55。PubMed.PMID:20697123pmed中央PMCID:PMC2942869

波特,克里斯托弗J.,等人。“Q系统:用于转基因表达,谱系跟踪和马赛克分析的可抑制二元系统。”细胞141(3)(2010):536-48。PubMed.PMID:20434990pmed中央PMCID:PMC2883883

魏,邢,克里斯托弗J. Potter,李琴罗申。“用Caenorhabditis elegans中的Q可抑制二元表达系统控制基因表达。”NAT方法9(4)(2012):391-5。PubMed.PMID:22406855pmed中央PMCID:PMC3846601.

riabinina等人。“改善和扩展Q-System试剂进行遗传操作。”NAT方法12(3)(2015):219-222。PubMed.PMID:25581800.pmed中央PMCID:PMC4344399.

赖,森林&t丁李。“具有双二元转录系统的遗传马赛克果蝇。“Nat Neurosci.9(5)(2006):703-9。PubMed.PMID:16582903

Del Valle Rodriguez,Alberto,Dominic Didiano&Claude Desplan。“基因表达和克隆分析的电动工具果蝇。“NAT方法9(1)(2011):47-55。PubMed.PMID:22205518.pmed中央PMCID:PMC3574576

De Boer,Herman A.,Lisa K. Comstock&Mark Vasser。“TAC启动子:衍生自TRP和LAC启动子的功能性杂交。”Proc Natl Acad Sci U S A.80(1)(1983): 21-5。PubMed.PMID:6337371pmed中央PMCID:PMC393301

Da Silva,Nancy A.&Sneha Srikrishnan。“代谢工程应用基因的引入和表达酿酒酵母酿酒酵母。“有限植物酵母菌。12(2)(2012):197-214。PubMed.PMID:22129153

addgene博客上的其他资源伟德体育中心

Addgene.org的资源

话题:1946伟德手机版下载 质粒101.质粒

发表评论

分享科学刚刚变得更容易...订阅我们的博客

订阅