逆转录病毒载体及其在科学研伟德BV下载究中的应用

由苏珊娜Bachle

慢病毒和γ-逆转录病毒遗传学

病毒是细胞内寄生虫和用于遗传信息的自然车辆。因此,它们为基因工程提供了优秀的工具。有几种不同的病毒载体可供选择,例如伽玛逆转录病毒,慢病毒伟德BV下载,腺病毒和腺相关病毒(AAV)。如果你想知道哪种病毒适合你的实验最好看看这个病毒矢量概述

逆转录病毒或逆转录病毒家族的病毒,包括γ-逆转录病毒和慢病毒属,具有永久性集成到宿主基因组中的独特能力,从而能够实现长期稳定的基因表达。γ-逆转录病毒载体来自伟德BV下载Moloney鼠白血病病毒(MOMLV,MMLV, MuLV,或MLV)或小鼠干细胞病毒(MSCV)基因组,而慢病毒载体来自伟德BV下载人类免疫缺陷病毒(HIV)基因组。

为了研究目的,逆转录病毒载体已经发展成“分裂载体系统”,伟德BV下载通过分离病毒基因和跨几个质粒的转基因表达。最常用的病毒载体系统由分离的包膜质粒和包装质粒以及转移质粒组成。这个概念确保了这些载体在实验中使用时的安全处理和表达。

逆转录病毒伟德BV下载载体为研究人员提供了一个巨大的工具箱,用于基因传递、多能干细胞的生成和单基因疾病的基因治疗。此外,逆转录病毒载体可以通过传递shR伟德BV下载NA或miRNA来调节基因表达。不断扩大的CRISPR领域广泛使用逆转录病毒传输系统,特别是基于慢病毒载体CRISPR合并的图书馆这允许在基因组实验中筛选成千上万的基因。

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Gamma-retrovrial与慢病毒矢量系统

γ -逆转录病毒载体具伟德BV下载有相对较高的转导效率,但与慢病毒载体相比,它们的传染性仅限于细胞分裂。找到使用伽马逆转录病毒载体的技巧伟德BV下载伽玛逆转录病毒指南找到流行的包装和伽马逆转录病毒包膜质粒在这里

慢病毒载体伟德BV下载是非常通用的工具,因为他们能够转导分裂和非分裂的细胞。更详细的描述慢病毒元素和第二代和第三代慢病毒系统可以在我们的慢病毒指南。列出了流行的包装和慢病毒包络质粒在这里。请注意,慢病毒和伽马逆转录病毒使用相同的基因产品进行包装,但是,这些蛋白质的异构体以及病毒的LTRs是不同的。因此,慢病毒和伽玛逆转录病毒包装质粒是不可互换的。一般的包膜质粒,如VSV-G,可以在两个系统中使用。

下面我提供了一些流行的γ-逆转录病毒和慢病毒载体的简要概述,用于基因调节,兴趣表达,淘汰和筛选的基因。伟德BV下载Addgene提供了更多有用的病毒载体:伟德BV下载跟随我们的病毒载体博客帖子关于最新的存款,协议,和在你的实验中使用逆转录病毒载体的技巧的更新。伟德BV下载

y retrovirus-01

伽玛逆转录病毒载体伟德BV下载

流行的伽玛 - 逆转录病毒转移载体

表达您感兴趣的基因

Pbabe-puro(质粒#1764)

逆转录病毒载体用于克隆和表达嘌呤霉素选择感兴趣的基因。一位创造pBabe的科学家写道它的名字是如何产生的在这里

克隆和表达RNAi

pmko.1 puro(质粒#8452)

RNA干扰(RNAi)是RNA介导的基因沉默机制。科学家可以表达SIRNA将细胞RNAi机器引导到沉默靶基因。这个空的mulv矢量来自Weinberg Lab.使研究人员能够在哺乳动物细胞中表达他们选择的siRNA。学习更多关于哺乳动物shRNA工具用于RNAi!!

Cre-Lox技术

CAG-GFP-IRES-CRE(质粒# 48201)

这种逆转录病毒载体Gage Lab.编码GFP和crea重组酶。CRE-LOX系统是一种可用于诱导特定现场的重组事件的技术,并且广泛用于小鼠转基因的领域。实验用途包括:CRE依赖性基因表达,基因敲除和选择标记移除。

CRISPR技术

pdcas9-人源化(质粒#44246)

在小鼠干细胞逆转录病毒启动子控制下表达一种催化活性(死亡)、人类密码子优化的Cas9,用于敲除哺乳动物基因。由气实验室。学习更多关于CRISPR质粒用于转录抑制

逆转录病毒质粒试剂盒

逆转录程序条形码图书馆(套件#1000000097)

WinSlow Lab.条形码文库由96个逆转录病毒质粒(基于小鼠干细胞病毒,MSCV)组成,每个质粒都有独特的6个核苷酸条形码。此集合可用于体内小分子文库的表型筛选,可与高通量测序相结合,对用感兴趣的化合物预处理的细胞进行多路分析。

Lentivirus-01.

慢病毒载体伟德BV下载

流行的慢病毒转移向量

表达您感兴趣的基因

pLenti-puro(质粒# 39481)

您可以克隆您感兴趣的基因进入这种四环素诱导,第3代慢病毒矢量骨干Shih实验室。您可以找到更多的慢病毒表达向量(空骨干网)在这里。

克隆和表达新的ShRNA序列

Plko(质粒#10878)

这种质粒已经使用RNAi财团,也称为遗传扰动平台,产生它们的shRNA图书馆为了支持哺乳动物基因组的功能调查,可以揭示遗传改变如何导致表型的变化。质粒配有1.9 kB的填充序列,可以用您选择的ShRNA顺序取出并替换。有关如何使用PLKO.1向量的更多信息和详细协议在这里

Cre-Lox技术

puro.crere空向量(质粒#17408)

这是沉积的慢病毒载体泰勒博士杰克斯博士。它带有CRE重组酶和嘌呤霉素抵抗盒。

没有时间制造病毒?把现成的慢病毒预科来自addgene病毒服务。

CRISPR技术

lentiCRISPR v2(质粒#52961)

这是第三代慢病毒骨干张实验室表达S. pyogenesCas9和Grna盒。它可用于产生慢病毒颗粒的〜10倍滴度而不是原始粒子Lenticrispr v1

来自张实验室的特别注:我们不断改善我们的CRISPR试剂。请检查www.genome-engineering.org.对于最新的信息。

检查我们CRISPR指南博客了解有关CRISPR和基因组编辑领域最新发展的更多信息。

慢病毒质粒套件

多种慢病毒表达系统试剂盒(试剂盒#1000000060)

MuLE(多重慢病毒表达)系统有助于同时将多种基因改变引入哺乳动物细胞。MuLE系统套件来自Frew Lab.由91个构建块进入载体和5个慢病毒目的地载体组成。这些载体可以诱导组合构成或可诱导的基因过表达、敲低(shRNA, miR-30-shRNA)、突变/编辑(CRISPR-Cas9)或缺失(Cre),以及用于细胞检测和动物成像研究的荧光或酶报告基因的表达。通过感染单一的嗜生态或两性MuLE慢病毒,同时改变多个基因的能力提供了显著的遗传能力,并允许在哺乳动物细胞和组织中进行高通量的遗传调节研究。

这种模块化和灵活的系统可以用于构建复杂的慢病毒修饰哺乳动物细胞的单一病毒感染。


参考

Maetzig T,等。γAREVIRAL载伟德BV下载体:生物学,技术和应用。病毒。2011. PUBMED.PMID: 21994751。pmed中央PMCID:PMC3185771.

Merten ow,等。慢病毒载体的生产。伟德BV下载Mol Ther方法Clin Dev。2016. PUBMED.PMID: 27110581。pmed中央PMCID: PMC4830361

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