抗体是用于检测细胞和组织的感兴趣蛋白的持续工具。虽然抗体的生产得到了很好的成熟，但也是个体实验室难以完成的过程。这nanobody基于RANbody平台的Sanes Lab.克服了这一限制，允许抗体的灵活设计和小规模生产。
抗体问题
- 常规抗体是非可再生试剂 -它们的生产需要动物牺牲，因为它们是动物衍生产品，在活动中可能有很多变化。
- 没有遗传标记 -由于抗体在动物而不是通过重组DNA中产生，因此它们不能被遗传标记，而是纯化后与报告（即荧光染料，HRP等）缀合。
- 单个实验室很难产生抗体杂交瘤提供单克隆抗体的替代和可再生来源，但它们对分享的昂贵和昂贵的替代性成本费力。
RANbody是什么?
一个ranbody是一个融合R.eporter一种ND A.N另身体那是在质粒上编码的。一种nanobody是〜150个氨基酸，单结构域抗体。为了创建他们的ranbodies，yamagata等人使用先前公布的纳米曲面序列，其靶向以下抗原：GFP，RFP，组蛋白蛋白H2a2a2b和肌动蛋白结合蛋白凝蛋白，但可以使用任何纳米常合序列制造ranody序列。RanBodies在293T细胞中表达，并且由于其IgGκ信号肽序列，从细胞分泌，使它们容易从细胞培养基中收获。如果需要，他们的标签允许进一步纯化，但它不需要它们使用。
每个RANbody都可以被两个不同的标签检测到:一个报告者和一个HA标签。记者来了三个品种:辣根HRP，意大利面怪物，和鸡IgY域，wh我将在下面进行更详细的讨论。HA标签可以用抗HA抗体进行染色，并作为独立于报告者的备份检测手段。唯一需要注意的是HA染色比报告染色弱。
为你的Ranbody挑选右边的记者
虽然所有三个记者染色培养细胞和组织切片，但一些记者更适合特定应用。阅读有关每个记者的更多信息，或为摘要提供表1。
HRP.
HRP标记为Ranbodies.不需要第二抗体检测。取而代之的是用酪胺信号放大来检测它们。当HRP将荧光标记的酪胺分子转化为高活性自由基时，就会发生酪胺信号放大，然后该自由基与邻近的残基共价连接，从而对它们进行荧光标记。HRP RANbody染色比一/标记二抗染色信号增加≥10倍，比固有荧光信号增加≥100倍。信号增加可能是由于较低的背景和更好的穿透样本，因为RANbodies较小的大小比抗体。
由于它们产生相同的信号，因此难以区分，因此只能使用多个HRP-ranbodies染色，因此只能使用一个HRP缀合的Ranbody。如果样品被剥离，可以用两个HRP ranbodies依次染色样品。然而，HRP-RanBodies与大多数多标记免疫组织化学方案相容，其中使用直接标记的初级或一次/标记的二抗被用于检测额外的抗原。
意大利面条怪物
意大利面条怪物是高抗原性的标签，有10个HA或10个MYC标签构建在一个GFP支架中。一些GFP纳米体在用意大利面怪物标记时染色很差，因为它们识别了这种GFP支架本身。幸运的是,GFP1 HA Spaghetti Monster Ranbody不识别脚手架，可用于检测GFP。可将Spaghetti Monster标记的Ranbodies用标记的抗HA或-MYC抗体或用抗HA或-MYC初级和标记的二抗。虽然用直接标记的抗HA或-MYC抗体的意大利面怪物Ranbody检测比HRP Ranbody检测不太敏感，但它大致像检测到具有标准初级/标记的二抗的相同抗原一样敏感。
鸡IgY
这位Ranbody记者包括两个鸡IGY域名。鸡Igy结构域对于组织的多色染色特别有用，因为它们具有与常用抗啮齿动物或-RABbit二抗的交叉反应性有限。鸡Igy ranbodies.用标记的抗鸡抗体容易检测。鸡Igy Ranbody.检测比HRP RanBody检测不太敏感，但与标准初级/二抗的抗原检测大致敏感。
表1:HRP，意大利面怪物和鸡IgY域RANbody reporter的关键特征总结。
| 记者 | 检测方法 | 使用 | 优点 | 缺点 | 抗原 |
| HRP（P） | 酪胺信号的HRP扩增 | 染色培养细胞和组织切片 放大荧光蛋白微弱信号(即GFP、RFP) |
检测不需要抗体 RANbody用HRP底物进行酶检测 比用一/标记二抗体检测抗原更敏感。当其他抗原被一标一标或一标二标检测时，与多标方案兼容 |
组织的酶促反应可能是麻烦的 酪胺试剂可能很贵 一次只能用一个HRP-Ranbody染色 |
绿色荧光蛋白那rfp.那H2A2B那Gelsolin |
| 意大利面怪物：HA（H）或MYC（M）版本 | 标记抗ha或-Myc抗体 | 染色培养细胞和组织切片 | 当用标记的抗HA或-MYC抗体检测时，大致像检测抗原一样敏感，用标准的初级/标记的次级 | 比HRP-Ranbody染色不太敏感 需要二次抗体染色 |
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| 鸡Igy（y） | 标记抗鸡IgY抗体 | 染色培养细胞和组织切片 | 非常适合组织的多色染色，因为它不会与抗啮齿动物或-兔子交叉反应 用抗鸡IgY抗体检测与用标准一标/标记二标检测抗原的灵敏度大致相同 |
比HRP-Ranbody染色不太敏感 需要二次抗体染色 |
绿色荧光蛋白那rfp.那H2A2B |
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参考文献
Sanes，J.R.，＆Yamagata，M。（2018）。记者 - 纳米型融合（RanBodies）作为通用，小，敏感的免疫组化试剂。pnas。PubMed.PMID:29440485。
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